L’absorption à 3 photons (3PA) est l’absorption simultanée de trois photons de fréquences identiques ou différentes dans le but d’exciter une molécule dans un état donné (habituellement, l’état fondamental) à un état électronique de plus haute énergie. La différence d’énergie entre ces deux états est égale à la somme des énergies des trois photons. L’absorption à trois photons est un processus de troisième ordre de plusieurs degrés de magnitude plus faible que l’absorption à 2 photons. Elle diffère de labsorption linéaire  parce qu’elle est proportionnelle au la puissance quatrième de l’intensité de la lumière, ce qui en fait un processus d’optique non linéaire.

Il faut savoir que la section efficace de capture exprimée en (3PA) Three Photon Absorption est donnée en unité (GM) de la physicienne Maria Goeppert Meyer 1931.(prix Nobel).

Une émission de fluorescence par conversion de fréquence par absorption de trois photons a été observée dans une solution de 2,5-benzothiazole 3,4-didécyloxythiène thiophène (BBTDOT) dans du tétrahydrofurane, pompé avec des impulsions laser de 1,06 micron à commutation Q de 10 ns. Le pic spectral de l’émission de fluorescence observée est situé dans la gamme 450-480 nm, et la dépendance de l’intensité de l’émission visible sur l’excitation IR obéit à la loi cubique.

À une concentration de soluté plus élevée (0,18 M/L) et à des niveaux modérés d’intensité d’excitation IR (50-200 MW/cm(2)), un comportement limite optique évident a été observé à la suite de l’absorption de trois photons. Le coefficient d’absorption non linéaire mesuré et la section efficace moléculaire correspondante d’absorption à trois photons sont gamma= 2,7 x 10(-18) cm(3)/W(2) et sigma'(3) = 8,8 x 10(-76) cm(6) s(2), respectivement.

Pour cette expérience j’utilise un laser DPSS q-switch de Spectra Physics model H10-106QW émettant à 1080nm des pulses de 0.35mJ en 12ns soit 0.1 MW et ceci à 50kHz.

L’absorption à 3 photons nécessite une intensité laser plus élevée que l’absorption 2 photons.

La section efficace du colorant en régime 3 photons est de

En régime absorption à 2 photons elle est de

et en absorption à 1 photon de 10 exp -16 cm2 (s/photon)

En utilisant un microscope 4Pi avec des faisceaux d’excitation et de désexcitation appropriés, il a été possible de créer un point uniformément de taille 50 nm, ce qui correspond à une diminution du volume focal par rapport à la microscopie confocale d’un facteur de 150 à 200 dans les cellules fixes. Avec la combinaison de la microscopie 4Pi et de la microscopie RESOLFT avec des protéines commutables, il est maintenant possible de prendre des images de cellules vivantes à faible luminosité avec des résolutions isotropes inférieures à 40 nm.